核心期刊發(fā)表植物組織培養(yǎng)中污染的分析及防控對(duì)策

　　污染是在組織培養(yǎng)過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌，導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。它是影響植物組織培養(yǎng)的一個(gè)重要因素，它通常會(huì)導(dǎo)致培養(yǎng)失敗造成很大的損失。

　　【摘　要】預(yù)防和控制污染是植物組織培養(yǎng)苗工廠化生產(chǎn)中重要的技術(shù)環(huán)節(jié)。本文核心期刊發(fā)表從通常污染的防控、內(nèi)源性污染的防控、繼代培養(yǎng)中污染防控、改善培養(yǎng)基的成分等方面，分析了怎樣減少組織培養(yǎng)中出現(xiàn)的污染問題。從而達(dá)到降低生產(chǎn)成本;減少對(duì)植株造成傷害;減少接種源及污染的機(jī)率等目的。

　　【關(guān)鍵詞】植物組織培養(yǎng),污染,預(yù)防控制,對(duì)策,核心期刊發(fā)表

　　組織培養(yǎng)中污染率的增加引起組培苗成本的提高，造成很大的經(jīng)濟(jì)損失，并對(duì)植株造成傷害，增加接種源及污染機(jī)率。因此,組織培養(yǎng)中降低污染率是工廠化生產(chǎn)中不可忽視的技術(shù)環(huán)節(jié)。

　　一、污染的類型及原因

　　1.通常污染

　　主要是外植體消毒不徹底，無菌操作和培養(yǎng)過程中，如：培養(yǎng)基、接種工具、接種室消毒不嚴(yán)格或操作不規(guī)范而導(dǎo)致的污染。

　　2.內(nèi)源性污染

　　內(nèi)源菌包括真菌和細(xì)菌。在植物組織培養(yǎng)中，由于材料內(nèi)部的內(nèi)生菌不能被一般的表面消毒方法所清除，隨著材料進(jìn)入培養(yǎng)過程，引起的污染稱為內(nèi)生性污染或內(nèi)源性污染。許多植物表面或大氣中生存的微生物，可經(jīng)由植物自然的開口或傷口進(jìn)入植物內(nèi)部，而有一些兼性腐生菌或絕對(duì)寄生菌，可藉由載體或是擁有一些侵入的機(jī)制侵入植物內(nèi)部，使植物感染病原菌。

　　二、污染所造成對(duì)組織培養(yǎng)生產(chǎn)的影響

　　污染不但造成人力、物力的浪費(fèi)，而且降低了植株的生命活力;影響其繁殖系數(shù)減少增殖倍數(shù);降低商品苗的品質(zhì)。并且增加接種源及污染的機(jī)率 如真菌污染的滅菌不當(dāng)會(huì)造成空氣污染，從而增加接種源污染的機(jī)率。

　　三、通常污染的防控對(duì)策

　　操作污染和環(huán)境污染指真菌污染和細(xì)菌污染。真菌污染主要來源于環(huán)境，細(xì)菌污染主要來源于接種材料及工具。此類污染可通過如下措施加以克服：

　　每次接種前應(yīng)對(duì)接種室的地面進(jìn)行清潔衛(wèi)生工作，并用75%的酒精噴霧使空氣中的灰塵沉降，并用紫外燈照射20~30min。接種前工作臺(tái)面要用新潔爾滅或75%酒精擦洗,使用超凈工作臺(tái)對(duì)接種環(huán)境污染的控制更有成效。但它應(yīng)置放在潔凈的房間，窗戶密封，并定期清洗過濾膜，以延長使用壽命。培養(yǎng)室的相對(duì)濕度應(yīng)控制在70%左右，相對(duì)濕度太高可以用抽濕機(jī)除濕。接種結(jié)束后，應(yīng)進(jìn)行地面清潔衛(wèi)生工作，即先打掃一遍，再用濕布擦過，并定期用甲醛熏蒸接種室。

　　金屬器械的滅菌：一般用火焰滅菌法，即把金屬器械放在95%的酒精中浸一下，然后放在火焰上灼燒滅菌。這一步在無菌操作中有要反復(fù)進(jìn)行。

　　用莖尖作外植體時(shí)，要盡量選取帶菌少的材料，如果室外栽培的材料污染太嚴(yán)重，可先將植物樣本挖出，改為室內(nèi)盆栽，噴布?xì)⑾x劑和殺菌劑，不便移栽的，可套塑料袋，待長出新枝條后，再行采樣接種。對(duì)污染嚴(yán)重的外植體，可以在培養(yǎng)基中加入殺菌劑。也可在菌類長入組織內(nèi)部時(shí)，除去韌皮組織，只接種內(nèi)部的分生組織可防止材料帶菌。外植體消毒常用藥劑有：70 %～75%的酒精，0.3%~0.6%的次氯酸鈉溶液和0.1 %的升汞溶液等。選用何種滅菌劑和滅菌時(shí)間根據(jù)不同情況及操作者的經(jīng)驗(yàn)來掌握，既要求將外植體表面的微生物徹底殺死，又要求盡可能少傷害外植體組織和表層細(xì)胞。先用75%的酒精棉花擦拭外植體材料再使用消毒藥劑常能取得較好的消毒效果。

　　消毒鍋的壓力表降到零后不能馬上出鍋。因冷熱空氣作用的負(fù)壓效應(yīng)，使外界環(huán)境的冷空氣倒吸入已滅菌好的培養(yǎng)瓶內(nèi)引起真菌污染，為避免該現(xiàn)象的發(fā)生，消毒后培養(yǎng)瓶應(yīng)留在鍋里，等冷卻后才出鍋。如果出現(xiàn)培養(yǎng)基造成的污染，就要及時(shí)地檢查滅菌鍋的性能或其他的問題。

　　四、內(nèi)源性污染的防控對(duì)策

　　一般來說，溫室內(nèi)盆栽的植株比室外栽培的植株含菌少，為了能更好的降低污染率，可把室外栽培變?yōu)槭覂?nèi)盆栽。要求：盆栽用土應(yīng)使用不含有機(jī)質(zhì)及經(jīng)消毒的清潔土壤，尤其是要采集地下材料時(shí)，須用經(jīng)過消毒蛭石等作栽培基質(zhì);施用無機(jī)肥，并對(duì)植物噴灑殺蟲劑和殺菌劑。不便移栽的，可套塑料袋，待長出新枝條后，再采樣接種。

　　將田間采集的枝條用水沖洗干凈后插入無糖的培養(yǎng)液或自來水中，使其發(fā)枝，后以這種新抽的嫩枝作為外植體，可大大減少內(nèi)源菌的污染。

　　相信隨著技術(shù)的日趨完善這些問題也會(huì)得到解決，就目前而言在污染的預(yù)防和控制上，無論是通常污染還是內(nèi)源性污染都需要從外植體的選擇及消毒滅菌入手，盡可能的使材料不帶菌;再在各環(huán)節(jié)中采取相應(yīng)的有效措施(如改進(jìn)消毒方法，改善培養(yǎng)基的成分等。才能從根本上預(yù)防和控制污染，從而達(dá)到生產(chǎn)所需的目的。

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