贊皇大棗黑腐病菌拮抗菌條件如何優(yōu)化

　　以贊皇大棗(Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’)黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌(Phoma sp.)為靶標(biāo)，對(duì)分離自土壤中的10株芽孢桿菌(Bacillus spp.)菌株進(jìn)行室內(nèi)多重篩選，并通過(guò)單因素試驗(yàn)對(duì)篩選獲得的目標(biāo)菌進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)基和發(fā)酵條件優(yōu)化。結(jié)果表明，芽孢桿菌菌株B01對(duì)靶標(biāo)菌有明顯而穩(wěn)定的拮抗效果;其最佳發(fā)酵培養(yǎng)基配方為蔗糖.

　　贊皇大棗(Ziziphus jujuba ‘Zanhuang Dazao’)又名金絲大棗，是中國(guó)700多個(gè)棗品種中惟一的自然三倍體[1]，整齊個(gè)大、皮薄肉厚、可食率高、營(yíng)養(yǎng)豐富，是天然的營(yíng)養(yǎng)保健食品，具有較高的商品價(jià)值[2]。黑腐病是贊皇大棗主要果實(shí)病害之一，近幾年來(lái)該病害發(fā)生日趨嚴(yán)重，一般年份病果率20%～30%，流行年份可達(dá)50%以上， 甚至可使棗果絕收[3]，極大地影響了贊皇大棗的產(chǎn)量、果實(shí)品質(zhì)和商品價(jià)值。

　　贊皇大棗作為鮮食加工兼用品種，對(duì)防治果實(shí)病害的農(nóng)藥使用具有較高的要求。生物農(nóng)藥相對(duì)于化學(xué)農(nóng)藥具有對(duì)環(huán)境、生態(tài)友好，對(duì)人類安全、無(wú)毒等優(yōu)點(diǎn)，得到了廣泛重視并發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，其中多種有益微生物及其代謝產(chǎn)物已成功應(yīng)用于植物病害的生物防治中，取得了較好的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益[4]�？莶菅挎邨U菌(Bacillus subtilis)GBO3(美國(guó))、A213(澳大利亞)、RB-14(日本)、B916(中國(guó))、B908(中國(guó))等具有優(yōu)良性狀的菌株已經(jīng)應(yīng)用于生產(chǎn)實(shí)踐[5];蠟質(zhì)芽孢桿菌(Bacillus cereus)菌株BC98-I[6]發(fā)酵液與菌絲粗提物對(duì)黃瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporium)具有良好抑制作用，可降低孢子萌發(fā)率，使菌絲生長(zhǎng)形態(tài)異常，且抑菌特性穩(wěn)定，對(duì)外界環(huán)境有很強(qiáng)的適應(yīng)力和耐受性。目前有關(guān)棗黑腐病的生物防治報(bào)道較少，陳貽金等[7]將農(nóng)用鏈霉素(70～140 IU/mL)、DT(50%， 600倍稀釋液)、卡那霉素(140 IU/mL)和土霉素(210 IU/mL)等在棗黑腐病發(fā)病期內(nèi)混合使用，保果率在90% 以上;李志清等[8]將3%中生菌素(800倍稀釋液)、4%農(nóng)抗120(400倍稀釋液)和4%雙抗(400倍稀釋液)等與化學(xué)農(nóng)藥甲基托布津等交替使用，防治棗黑腐病效果也較好，但利用芽孢桿菌(Bacillus spp.)開(kāi)發(fā)防治棗黑腐病生防制劑的研究鮮見(jiàn)報(bào)道。為尋找棗果實(shí)病害無(wú)公害防治的新途徑，本研究以莖點(diǎn)霉菌(Phoma sp.)為靶標(biāo)，對(duì)前期自土壤中分離獲得的10株具抗真菌活性的芽孢桿菌菌株進(jìn)行了室內(nèi)多重篩選和發(fā)酵培養(yǎng)基及發(fā)酵條件優(yōu)化試驗(yàn)，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

　　1 材料和方法

　　1.1 材料

　　1.1.1 靶標(biāo)菌 贊皇大棗黑腐病主要病原菌莖點(diǎn)霉菌，從山西省石樓縣患贊皇大棗黑腐病的病果中分離獲得，由山西大學(xué)應(yīng)用化學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)室分離鑒定。

　　1.2 拮抗芽孢桿菌的多重篩選

　　1.2.1 病原菌培養(yǎng)

　　芽孢桿菌屬細(xì)菌，因具有生長(zhǎng)速度快、營(yíng)養(yǎng)需求簡(jiǎn)單、有較強(qiáng)的耐熱性及抗逆性、在植物表面易于存活與繁殖、對(duì)人畜無(wú)害、不污染環(huán)境、制劑穩(wěn)定、施用方便等優(yōu)點(diǎn)[13]而備受關(guān)注。一些芽孢桿菌菌株已經(jīng)開(kāi)發(fā)成生物農(nóng)藥投入到植物病害的防治中。本研究篩選獲得的芽孢桿菌B01雖然在室內(nèi)篩選中表現(xiàn)出了良好的抑菌效果，具有作為生物農(nóng)藥的潛力，但還需對(duì)其田間效果作進(jìn)一步試驗(yàn)研究。此外，還需對(duì)該菌株進(jìn)行鑒定及抑菌有效組分分離、理化性質(zhì)測(cè)定、劑型研制、安全性試驗(yàn)等方面的研究工作，為開(kāi)發(fā)具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值的生物農(nóng)藥奠定基礎(chǔ)。

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　　閱讀期刊：中國(guó)南方果樹(shù)

　　《中國(guó)南方果樹(shù)》(雙月刊)曾用刊名：(中國(guó)柑桔)1972年創(chuàng)刊，堅(jiān)持理論與提高并重，側(cè)重普及的辦刊宗旨。我國(guó)南方和西部惟一的全國(guó)性技術(shù)類果樹(shù)期刊，直接從生產(chǎn)、科研、教學(xué)人員的自由來(lái)稿中，擇優(yōu)編發(fā)那些根據(jù)實(shí)踐得到的第一手資料撰寫(xiě)的高新技術(shù)、應(yīng)用技術(shù)原始文獻(xiàn)。注重技術(shù)的創(chuàng)新性、先進(jìn)性、實(shí)用性以及對(duì)生產(chǎn)的指導(dǎo)性和報(bào)道的時(shí)效性。